Cell lines and Salmonella

Abstract

Infectie met Salmonella kan gepaard gaan met de invasie van darmepitheelcellen. De aan de invasie voorafgaande aanhechting leidt reeds tot de transmigratie van witte bloedcellen (neutrofielen) vanuit de bloedbaan naar het epitheelweefsel. De migratie wordt gestimuleerd door de productie van chemokines, waaronder interleukine-8 (Il-8) door epitheelcellen. Wij hebben een in vitro model systeem ontwikkeld (humaan epitheelweefsel gekweekt in microtiterplaten) waarin gastheer - pathogeen interacties kunnen worden bestudeerd. Epitheelcellen zijn gedurende een uur blootgesteld aan verschillende pathogene micro-organismen, waarna de Il-8 response is gemeten. Als controle zijn meegenomen een Escherichia coli stam zonder LPS en een probiotische Lactobacillus. De resultaten laten zien dat de IL-8 productie per pathogeen varieert, waarbij Salmonella enteritidis de hoogste respons geeft. In vervolgexperimenten zijn drie concentraties S. enteritidis gebruikt, waarna de respons gedurende 24 uur is gemeten. De gebruikte cellijn bleek na 24 uur nog intact, de Il-8 productie correleerde met de doses, en nam toe in de tijd. Hieruit kan geconcludeerd worden dat het door ons ontwikkelde model gebruikt kan worden voor het bestuderen van factoren die van invloed zijn op dosis-respons relaties. De respons betreft dan prikkeling van het immuunsysteem ten gevolge van adhesie en invasie van darmepitheelcellen door salmonellae. Tenslotte wordt een benaderingwijze voorgesteld om resultaten van in vitro dosis-respons experimenten te vertalen naar de mens.<br>

In human gastrointestinal disease caused by Salmonella, transepithelial migration of neutrophils follows the attachment of bacteria to epithelial tissue. This migration of neutrophils is stimulated by the release of chemokines, including interleukin-8 (Il -8), from the epithelial cells. We have developed an in vitro model system (human epithelial monolayers, among which Caco-2 cells grown on microtiter multiwell plates) for studying host-pathogen interactions. After infection with different pathogens we measured Il-8 production during time. Results showed that Il-8 release was time related and varied with the pathogen. Salmonella enteritidis (Se) did induce the highest response. Subsequently, three doses of this Se strain were used and the Il-8 response was measured at different time points. Caco-2 cells remained intact over a period of 24h, the production of Il-8 increased in time and was found to be Se dose-dependent. Other tested epithelial monolayers, such as HT29 colon cancer cells, gave similar results.<br>