• Login
    View Item 
    •   Home
    • RIVM official reports
    • RIVM official reports
    • View Item
    •   Home
    • RIVM official reports
    • RIVM official reports
    • View Item
    JavaScript is disabled for your browser. Some features of this site may not work without it.

    Browse

    RIVM Publications RepositoryCommunitiesTitleAuthorsIssue DateSubmit Date

    My Account

    LoginRegister

    Statistics

    Display statistics

    On-line derivatization of peptides for improved sequence analysis by micro column LC-ESI-tandem mass spectrometry

    • CSV
    • RefMan
    • EndNote
    • BibTex
    • RefWorks
    Average rating
     
       votes
    Cast your vote
    You can rate an item by clicking the amount of stars they wish to award to this item. When enough users have cast their vote on this item, the average rating will also be shown.
    Star rating
     
    Your vote was cast
    Thank you for your feedback
    Authors
    Cardenas MS
    van der Heeft E
    Meiring MD
    ten Hove GJ
    Herberts C
    van Els CACM
    de Jong APJM
    Type
    Report
    Language
    en
    
    Metadata
    Show full item record
    Title
    On-line derivatization of peptides for improved sequence analysis by micro column LC-ESI-tandem mass spectrometry
    Translated Title
    On-line derivatizering van peptiden voor verbeterde sequentieanalyse met microkolom LC-ESI-tandem massaspectrometrie
    Publiekssamenvatting
    Een on-line methode is ontwikkeld voor een gecombineerde derivatisering en analyse met behulp van LC-ESI/MS van peptides op femto-mol niveau. Peptides werden na belading op een trapkolom in een microkolom schakelsysteem gederivatiseerd met N-succinimidyl-2(3-pyridyl)acetate (SPA) in gebufferd aqueous medium by pH 7. Het gemakkelijk hydrolyseerbare reagens was opgelost in droge methanol en werd vervolgens in het HPLC systeem gemengd in een 3% volume ratio met de buffer en vervolgens over het monster op de trapkolom geleid. Na de reactie en het wassen van de voorkolom met water werden de reactieproducten (derivaten) met behulp van een gradientelutie van de trapkolom overgebracht naar de analytische kolom voor scheiding en ESI tandam MS analyse. Een vrijwel kwantitatieve reactie vond plaats met N-terminale en lysine amino groepen. De reactie met de lysine aminogroep verschaft een doeltreffende chemische methode voor differentiatie tussen de isobare residuen glutamine en lysine. In een aantal gevallen vond een geringe reactie plaats met de phenolische OH groep van tyrosine. De pyridylacetyl groep op de N-terminale aminogroep kan leiden tot een verandering van het fragmentatiepatroon in MS/MS ten gunste van de vorming van zogenaamde, hetgeen aanvullende informatie levert in MS/MS spectra in sequentie-analyses.<br>
    An on-line method has been developed for the derivatization and LC-ESI/MS analysis of peptides at the femto-mol level. Peptides were reacted with N-succinimidyl-2(3- pyridyl)acetate (SPA) in buffered aqueous medium at pH 7 following loading on a precolumn (PC) in a microcolumn switching system. The fast hydrolysing reagent was solved in dry methanol and mixed in a 3 vol% ratio with a buffer just before reaching the sample on the PC. Following the reaction and wash, the N-pyridylacetyl (PA) derivatives formed were transferred to the analytical micro-HPLC column for separation and subsequent ESI tandem MS analysis. The reaction was nearly quantitative and takes selectively place at the N-terminal and lysine amino functions, the latter providing a chemical means to distinguish between isobaric residues lysine (K) and glutamine (Q) in peptide sequencing. In some cases, a minor reaction was observed with the tyrosine hydroxyl group. The N-terminal PA groups was capable to alter the collision induced fragmentation (CID) pathway of peptides in favour to the formation of abundant b-type ions, a helpful feature for sequence elucidation of unknown peptides, particularly for quadrupole ion trap instruments.<br>
    Publisher
    Rijksinstituut voor Volksgezondheid en Milieu RIVM
    Sponsors
    RIVM
    Collections
    RIVM official reports

    entitlement

     

    DSpace software (copyright © 2002 - 2023)  DuraSpace
    Quick Guide | Contact Us
    Open Repository is a service operated by 
    Atmire NV
     

    Export search results

    The export option will allow you to export the current search results of the entered query to a file. Different formats are available for download. To export the items, click on the button corresponding with the preferred download format.

    By default, clicking on the export buttons will result in a download of the allowed maximum amount of items.

    To select a subset of the search results, click "Selective Export" button and make a selection of the items you want to export. The amount of items that can be exported at once is similarly restricted as the full export.

    After making a selection, click one of the export format buttons. The amount of items that will be exported is indicated in the bubble next to export format.